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大蒜黄酮的提取和测定研究进展
张泽英 陆 艳 李云捷 董雪丽 吴季勤 钱彩虹 (武汉生物工程学院 湖北 武汉 430415)
摘 要 介绍了目前从大蒜中提取黄酮类化合物的常用方法和检测分析方法,为今后进一步寻求更优化的从大蒜提取黄酮类化合物的试验室研究或工业化生产方法提供参考依据。
关键词 大蒜 黄酮 提取 测定

黄酮类化合物广泛存在于蔬菜、水果、牧草和药用植物中,是一类以苯基色原酮为母核的多酚化合物,结构中含有酮基。大蒜是我国常用的中药之一,有杀虫、消肿、抗菌、消炎等作用,被誉为“天然广谱抗生素”。研究表明大蒜富含黄酮类化合物,其成分主要是杨梅黄酮、榭皮素、芹菜素。大蒜黄酮中含有拮抗内毒素的有效成分,对脓毒症有一定治疗作用,除此之外,可能还具有抗炎、降脂等生物学功效。本文就目前国内外关于大蒜黄酮的提取和测定研究情况进行了详细的综述。
1 大蒜黄酮的提取
1.1 水提法
水提黄酮类化合物一般是通过粉碎、脱脂、浸提、过滤、浓缩得到的。覃成箭等研究了以水为提取剂,在煮沸条件下浸提三次,每次3h,经离心,加入等体积95%乙醇除杂,再离心、过滤、浓缩后,真空干燥获得的疏松固体,即为大蒜黄酮粗提物。粗提物经乙醇回流提取、正丁醇萃取得到黄酮类化合物。蒋栋能等利用100℃热水回流提取1h,浓缩后经乙醇沉淀蛋白质及粘多糖,再减压浓缩经乙醇萃取,冷冻干燥,经定性检测确定为黄酮类化合物。水提取大蒜黄酮工艺简单、安全且成本低,是一条理想的提取大蒜黄酮类物质的有效途径。
1.2 溶剂提取法
由于黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂中,所以很多黄酮类物质提取剂研究多采用有机溶剂提取,可用冷浸法或加热抽提法提取,不同有机溶剂对不同植物黄酮类化合物的提取效果具有一定的差异,其中乙醇和甲醇是普遍采用的提取溶剂。Koo Hui Miean将大蒜洗净,在40℃烘干,磨细,然后加入50%的甲醇(含1.2M盐酸,1.6g/L TBHQ),在90℃加热回流2h,经HPLC检测得到三种黄酮类化合物。李荣华用含盐酸和TBHQ的80%乙醇溶液提取得到黄酮类化合物芹菜素。
1.3 超声波法
超声辅助法是利用超声波的振动空化、机械粉碎、搅拌等作用,使植物组织在溶剂中瞬时产生的空化泡崩溃,而使组织中的细胞破裂,利于溶剂渗透到植物细胞内部,使细胞中的成分进入溶剂中,加速相互渗透、溶解,以增加中药材中黄酮类化合物在溶剂中的溶解。超声萃取技术的优点是可以大幅度地提高有效成分的提取率,缩短提取时间。一般处理几十分钟即可,具有能耗低、效率高、省溶剂、不破坏有效成分的特点。具体工艺为:取大蒜瓣,烘干,粉碎。称取大蒜粉末约6g,加80mL95%乙醇,超声波提取2.5h,抽滤。滤渣再加80mL 95%乙醇,超声波提取2.5h,抽滤,合并两次滤液,减压回收乙醇至滤液仅剩25mL左右为止,放置于250mL容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液,取样检测提取率。在超声作用下的提取率明显高于无超声作用下的提取率,达到省时、高效、节能的目的。
2 大蒜黄酮的测定
竹叶黄酮的测定依据主要是黄酮类化合物的结构和性质,以及其颜色反应。定量测定方法主要有比色法和高效液相色谱法。
2.1 黄酮类化合物的定性
黄酮类化合物在其基本碳架上含有碱性氧原子,而绝大多数都是带有酚性羟基的衍生物,因而能与某些金属离子产生络合反应和与某些较强的还原剂发生颜色反应。因此,可以根据黄酮类化合物的这一特性对其进行定性鉴定。主要颜色反应有:①紫外光下呈色反应。取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰白色并有荧光斑点;②浓氨水反应。取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏0.5min,立即在紫外光下观察,呈极明显的灰绿色荧光斑点;③三氯化铝反应。取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干。在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点;④乙酸镁反应。取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点;⑤盐酸一镁粉反应。取乙醇提取液lmL于试管中加镁粉,再加入浓的盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色;⑥纸层析。取样品溶液点在滤纸上。用正丁醇:醋酸:水=4:1:5为展开剂,上行展开5h,取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液,吹干后于紫外光下,可见荧光斑点。
2.2 比色法
比色法测定总黄酮的原理:黄酮类化合物与铝离子在碱性与亚硝酸根存在条件下形成黄酮的铝络合物,生产稳定的黄色。在一定范围内黄色的深浅与黄酮含量呈一定的比例关系,以芦丁(对照品)作标准,于最大吸收波长处比色定量测定。具体操作:取芦丁对照品的乙醇溶液系列,用乙醇溶液补充至一定体积(常见的乙醇溶液体积分数有30%、60%、80%),加入亚硝酸钠,摇匀。放置一定时间后加入硝酸铝或氯化铝,一定时间后再加入氢氧化钠溶液,混匀,用乙醇溶液稀释至刻度,一定时间(一般是10min)后在510nm(也有在509nm、274nm)处测定吸光度。覃成箭、黄琐义等均用比色法测出了大蒜中总黄酮的含量。
2.3 高效液相色谱法
Koo Hui Miean、李荣华采用高效液相色谱法对大蒜样品中黄酮化合物进行测定。方法:以C-18柱为固定相,流动相为甲醇:水=50:50,60:40,三氟乙酸调节至pH 2.5,流速1mL/min,检测波长365nm,338nm。
3 结语
目前对大蒜黄酮的研究大多采用的提取方法比较简单,提取物质量一般,测定方法一般采用比色法或液相色谱法,比色法更为普遍。一些高效、方便快捷的提取新方法,如微波萃取法、酶解法、超临界流体提取法,以及准确、灵敏的检测方法,如极谱法、气相色谱法、液相色谱与质谱联用法、毛细管电泳法等在大蒜黄酮研究中的应用有待进一步研究。

参考文献
1 Koo Hui Miean and Suhaila Mohamed. Flavonoid (Myricetin,Quercetin, Kaempferol,Luteolin,and Apigenin) Content of Edible Tropical Plants[J]. Agric Food Chem, 2001(49)
2 蒋栋能,郑江.大蒜黄酮的分离及抗内毒素活性的评价.中国临床药理学与治疗学[J],2004(10)
3 覃成箭,姚小敏,吴玉华等.大蒜中总黄酮的提最及其含量测定.右江民族医学院学报[J],2005(5)
4 李荣华,夏薇,吴坤.蔬菜中芹菜素高效液相色谱测定.中国公共卫生[J],2007(7)
5 黄锁义,刘娇,罗建华.超声波提取大蒜总黄酮及鉴别.时珍国医国药[J],2006(12)
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